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Que signifie unités/mg pour Streptavidine

Que signifie unités/mg pour Streptavidine


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J'ai de la streptavidine pour la réaction de surface. L'étiquette indique « liaison à la biotine : 16 unités/mg ». Qu'est-ce queunités/mgmoyenne?

Cela signifie-t-il « 1 mg de biotine peut se lier à 16 unités SA » ?

Combien est leunitéici?


16 unités/mg signifie 16 unités par milligramme de protéine.

De nombreuses entreprises, dont Invitrogen, définissent 1 unité de streptavidine comme la quantité de streptavidine nécessaire pour lier 1 microgramme de biotine.


Juste pour ajouter à la réponse de Chris Stronk :

1 U SAV peut lier 1 ug de biotine

Cela vous indique que dans un échantillon de SAV de 16 U/mg, chaque mg de SAV liera 16 ug de biotine. Vous pouvez déterminer le rapport molaire à partir de ceci :

16 $mu g BIOcdotfrac{1mol BIO}{244310000ug BIO}cdotfrac{52800000mg SAV}{mol SAV}$

Ce qui équivaut à :

$frac{3.46mol BIO}{mol SAV}$

Théoriquement, chaque tétramère SAV peut lier 4 biotines. Cela vous indique qu'il existe une certaine hétérogénéité dans l'échantillon et qu'en moyenne, chaque tétramère SAV peut se lier à 3,46 biotines.


Ce que signifient vos niveaux de cholestérol

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INTRODUCTION

La capture de la petite molécule de biotine (vitamine H/vitamine B7) par la protéine bactérienne SA (streptavidine) est à la fois un outil puissant en biologie et un système modèle pour l'étude des interactions protéine-ligand de haute affinité. Les principales caractéristiques sont l'affinité femtomolaire, la spécificité élevée, le taux d'activation élevé et la résilience de l'AS au pH, à la température et au dénaturant [1–3]. Il est également important que les protéines ligases de biotine puissent attacher la biotine à des résidus de lysine spécifiques in vitro ou dans des cellules vivantes [4,5]. Les applications de SA incluent l'imagerie [6], le nano-assemblage [7] et l'immunothérapie anticancéreuse pré-ciblée [8]. En tant que modèle privilégié en biophysique et en ingénierie des protéines, cette interaction protéine-ligand a été étudiée par au moins 200 mutations ponctuelles de SA [3,9–11], plus de 30 ligands alternatifs à petites molécules [1,12–14], calcul simulation [15–18], cristallographie [2] et dynamique des forces monomoléculaires [19].

Malgré la force de la liaison SA-biotine, l'interaction peut échouer et échoue dans des conditions difficiles. La dissociation de la biotine devient importante et parfois rapide en réponse au faible pH des endosomes [20], aux températures élevées utilisées pour l'amplification de l'ADN [21], à la fixation aux nanoparticules [22] et aux forces de cisaillement du flux [23]. Le faible taux de SA de type sauvage pour les conjugués de biotine a été amélioré récemment, lorsque nous avons découvert que le mutant S52G R53D de SA, nommé Tr (traptavidine) [23a], avait une dissociation de la biotine plus de 10 fois plus lente que la biotine sauvage. -type SA, ainsi qu'une stabilité mécanique et thermique améliorée [24]. La liaison plus forte de Tr nous a permis de générer un obstacle difficile pour l'un des moteurs moléculaires linéaires les plus rapides connus, FtsK, afin d'évaluer la coordination du tir autour de l'anneau hexamérique en tant que FtsK transloqué sur l'ADN [24,25].

Pour comprendre la base de la liaison résiliente et de la stabilité de Tr aux températures élevées, dans la présente étude, nous avons résolu les structures cristallines de l'apo-Tr et de la biotine-Tr et les avons comparées aux structures existantes de SA. De plus, nous avons purifié un Tr monovalent, pour étudier le rôle des effets inter-sous-unités dans la stabilité du Tr et aussi pour caractériser un outil qui permet une liaison ultra-stable de cibles biotinylées sans réticulation.


Essai contrôlé randomisé de N-thérapie à l'acétylcystéine pour RYR1-myopathies liées

Objectif: Pour étudier l'efficacité de N-acétylcystéine (NAC) pour diminuer le stress oxydatif élevé et augmenter l'endurance physique chez les personnes atteintes de myopathies liées au récepteur de la ryanodine 1 (RYR1-RM).

Méthodes : Dans cette évaluation de l'histoire naturelle de 6 mois (n = 37) suivie d'un essai randomisé, en double aveugle, contrôlé par placebo, 33 participants éligibles ont été randomisés en bloc (1:1) pour recevoir du NAC (n = 16) ou un placebo ( n = 17), par voie orale pendant 6 mois (dose adulte 2 700 mg/j dose pédiatrique 30 mg/kg/j). Le critère d'évaluation principal était la concentration d'isoprostane 15-F2t dans l'urine et le critère d'évaluation co-principal cliniquement significatif était la distance du test de marche de 6 minutes (6MWT).

Résultats: Par rapport à la population générale, les participants avaient des concentrations initiales élevées d'isoprostane 15-F2t et la plupart avaient une distance de 6MWT réduite (moyenne ± ET 3,2 ± 1,5 vs 1,1 ± 1,7 ng/mg de créatinine et 468 ± 134 vs 600 ± 58 m, respectivement, les deux p < 0,001). La concentration d'isoprostane 15-F2t et la distance 6MWT n'ont pas changé au cours de l'évaluation de l'histoire naturelle de 6 mois (p = 0,98 et p = 0,61, respectivement). Le traitement par NAC n'a pas amélioré la concentration d'isoprostane 15-F2t (les moindres carrés signifient une différence de 0,1 [intervalle de confiance à 95 % [IC] -1,4 à 1,6] ng/mg de créatinine, p = 0,88) ou distance 6MWT (les moindres carrés signifient la différence 24 [IC à 95 % -5,5 à 53,4] m, p = 0,11). La NAC était sûre et bien tolérée aux doses administrées dans cette étude.

Conclusion: En ambulatoire RYR1- Chez les individus affectés par la RM, nous avons observé une évolution stable de la maladie et corroboré les rapports précliniques d'un stress oxydatif élevé et d'une diminution de l'endurance physique. Le traitement à la NAC n'a pas réduit le stress oxydatif élevé, tel que mesuré par l'isoprostane 15-F2t.

Classement des preuves : Cette étude fournit des preuves de classe I que, pour les personnes atteintes de RYR1-RM, le traitement par la NAC orale ne diminue pas le stress oxydatif tel que mesuré par le 15-F2t isoprostane.

Identifiant Clinicaltrialsgov : NCT02362425.

Copyright © 2020 Le(s) auteur(s). Publié par Wolters Kluwer Health, Inc. au nom de l'American Academy of Neurology.


Résultats

Conception et développement d'un système de ligand générique

Notre objectif était de concevoir un système nécessitant une manipulation minimale du récepteur, afin de préserver sa structure et ses interactions. De plus, nous avons cherché à créer un ligand exprimé en surface cellulaire qui engagerait des récepteurs avec une affinité comparable aux interactions physiologiques NTR-ligand et qui, lorsqu'il est lié au récepteur, préserverait la distance intermembranaire cellule-cellule.

Nous avons développé un ligand générique basé sur l'interaction entre le peptide Twin-Strep-tag (séquence WSHPQFEK GGGSGGGSGGSA WSHPQFEK ), qui possède deux motifs Strep-tag II, et Strep-Tactin, une variante de la streptavidine (décrit dans la figure 1) [26 –28].

(1) Chaque récepteur est construit avec une étiquette Twin-Strep à l'extrémité extracellulaire et exprimé dans des lignées cellulaires. (2) Le ligand générique est constitué de deux composants : une ancre de ligand exprimée en surface cellulaire avec SpyTag N-terminal et une protéine trivalente soluble Strep-Tactin-SpyCatcher. Trivalent Strep-Tactin-SpyCatcher est ajouté aux cellules exprimant l'ancre de ligand générique. Lorsque SpyCatcher et SpyTag interagissent, une liaison isopeptidique covalente spontanée se forme entre eux, créant le ligand générique complet. (3) Les trois sites de liaison de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent sont disponibles pour la ligature par le récepteur marqué Twin-Strep. Deux sites de liaison sont nécessaires pour l'engagement complet de Twin-Strep-tag.

Le NTR d'intérêt, exprimé sur une cellule « réceptrice », est génétiquement modifié pour ajouter le peptide Twin-Strep-tag à l'extrémité N extracellulaire, où il est accessible pour l'engagement par le ligand générique présenté sur une autre cellule « ligand » (Fig. 1). Ce ligand est composé de deux composants : une ancre de ligand de surface cellulaire et une protéine de fusion soluble qui forme spontanément une liaison covalente avec l'ancre. L'ancre de ligand comprend les parties transmembranaires et cytoplasmiques du CD80 de souris fusionnées à un peptide SpyTag N-terminal, formant la moitié de la paire de protéines fractionnées formant une liaison covalente SpyTag/SpyCatcher [11, 29, 30]. La protéine de fusion soluble comprend Strep-Tactin trivalent, qui a trois sites de liaison pour les motifs Strep-tag II, fusionnés à SpyCatcher (trivalent Strep-Tactin-SpyCatcher) [26, 27]. Lorsque Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent soluble est incubé avec des cellules exprimant l'ancre du ligand, SpyTag et SpyCatcher forment spontanément une liaison covalente. Cela donne un ligand de surface cellulaire capable de se lier à un récepteur marqué Twin-Strep (Fig 1).

Sur la base des structures disponibles de Strep-Tactin et SpyTag/SpyCatcher et des estimations des longueurs de linker, nous prédisons que le ligand générique complet aura une longueur extracellulaire similaire à 2 à 3 domaines de type immunoglobuline lorsqu'il est étendu (numéros d'accession de la banque de données de protéines [PDB] : 1KL3, 4MLI) [12, 31]. Ceci est comparable aux ligands NTR physiologiques (discutés par Dushek et ses collègues [1]).

Préparation de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent

Pour préparer les tétramères trivalents Strep-Tactin-SpyCatcher, nous avons utilisé une méthode précédemment utilisée pour générer des tétramères de streptavidine de valence définie [9, 32]. Cela utilise une sous-unité de streptavidine mutée qui a une activité de liaison à la biotine négligeable, appelée streptavidine «morte». La biotine et le Strep-tag II occupent la même poche superficielle de streptavidine, et nous avons donc supposé que la sous-unité morte de streptavidine est également incapable de se lier au Strep-tag II [33]. Les sous-unités Strep-Tactin ont été repliées à partir de corps d'inclusion bactériens avec des sous-unités de streptavidine morte fusionnées à son extrémité C à SpyCatcher (streptavidine morte-SpyCatcher) dans un rapport molaire de 3: 1 (Fig. S1).

La streptavidine morte-SpyCatcher contient une insertion polyaspartate permettant la purification du tétramère trivalent Strep-Tactin-SpyCatcher à partir d'autres configurations possibles en utilisant la chromatographie d'échange d'anions (S1 Fig).

Nous avons analysé un échantillon du premier pic élué, supposé être celui de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent, en utilisant SDS-PAGE. Lors de l'ébullition, le tétramère est réduit en monomères individuels de Strep-Tactin et de streptavidine morte-SpyCatcher, permettant la visualisation de la proportion relative des sous-unités (S1 Fig). À titre de comparaison, nous avons analysé un échantillon d'un pic ultérieur, que nous prévoyons contenir du Strep-Tactin monovalent (1 × Strep-Tactin, 3 × streptavidine mort-SpyCatcher) en fonction de l'ordre d'élution. Le rapport de Strep-Tactin aux sous-unités mortes de streptavidine-SpyCatcher était plus élevé que prévu (4,7:1 pour Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent) mais était cohérent avec un rapport de 3:1 par rapport au rapport de sous-unités de la protéine monovalente (S1 Fig ).

Pour confirmer que la protéine purifiée était le tétramère souhaité, nous avons utilisé un test d'extinction de fluorescence de la biotine-4-fluorescéine précédemment utilisé pour estimer le nombre de sites de liaison à la biotine par tétramère de streptavidine (S1 Fig) [32]. Lorsqu'elle est liée à Strep-Tactin, la fluorescence de la biotine-4-fluorescéine est éteinte. À mesure que la concentration de biotine-4-fluorescéine ajoutée au Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent augmente au-dessus de la saturation du site de liaison, il y a une quantité croissante de biotine-4-fluorescéine libre (non éteinte) en solution. Ceci est visualisé comme une forte augmentation de la fluorescence, le point d'inflexion indiquant la saturation. Le titrage de la biotine-4-fluorescéine a donné un nombre estimé de 4,2 sites de liaison par Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent (S1 Fig). Bien que supérieur à la valeur attendue de 3, il est trois fois le nombre de sites de liaison estimé calculé pour le pic de Strep-Tactine monovalent prédit (1,4). Nous supposons qu'il y a le même nombre de sites de liaison Strep-tag II disponibles par tétramère.

Caractérisation du ligand générique

Affinité entre Twin-Strep-tag et Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent.

Nous avons utilisé la résonance plasmonique de surface et une protéine de fusion Twin-Strep-tag–mTFP pour analyser la liaison Twin-Strep-tag au Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent à 37°C. Le K a été mesurée à 6,8 M (figure 2A). Ceci est comparable aux affinités rapportées pour les interactions physiologiques NTR-ligand que nous souhaitons reproduire [34-36].

(A) La liaison à l'équilibre représentative mesurée par résonance plasmonique de surface de Twin-Strep-tag-mTFP injecté sur Strep-Tactin-Spycatcher trivalent immobilisé à 37 ° C est indiquée. Le K (SEM) pour les données collectées (m = 11) est de 6,8 M (0,62 M), et la pente moyenne de Hill (SEM) est de 0,46 (0,03) à 2 s.f. (B) Une indication relative du niveau de ligand générique par cellule en fonction de la concentration trivalente Strep-Tactin-SpyCatcher ajoutée aux cellules. Les valeurs médianes d'intensité de fluorescence extraites des analyses de cytométrie en flux de cellules incubées avec ATTO 647 biotine sont présentées. (C) Les cellules d'ancrage du ligand CHO préincubées avec du Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent ou du tampon seul ont été incubées avec un titrage de biotine-4-fluorescéine dans un test d'extinction de fluorescence. Le point d'inflexion est utilisé pour calculer le nombre absolu moyen de ligands génériques par cellule. (D) La concentration saturante de biotine-4-fluorescéine a été extraite de C et convertie en nombre de ligands génériques par cellule. Ceci a été substitué comme maximum dans la courbe ajustée en (B) pour interpoler le nombre moyen de ligands génériques par cellule en fonction de la concentration trivalente Strep-Tactin-SpyCatcher ajoutée aux cellules. Les données numériques récapitulatives sont fournies dans les données S1. CHO, mTFP d'ovaire de hamster chinois, protéine fluorescente de sarcelle monomère SEM, erreur standard de la moyenne s.f., chiffres significatifs.

Caractérisation des conditions optimales pour l'ancrage du ligand : liaison trivalente Strep-Tactin-SpyCatcher.

Une lignée cellulaire d'ancrage de ligand stable à haute expression a été établie et maintenue sous sélection (S2 Fig). Les cellules CHO ont été utilisées pour éviter toute interaction confusionnelle récepteur-ligand qui pourrait se produire si les cellules récepteur et ligand étaient toutes deux humaines.

Nous avons exploré les conditions optimales pour le couplage covalent entre l'ancre de ligand présentée à la surface cellulaire et le Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent soluble. Conformément aux découvertes de Zakeri et de ses collègues, nous avons constaté que le couplage entre les cellules d'ancrage du ligand CHO et le Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent était le plus efficace dans le tampon à pH 5–6 (S2 Fig) [11]. La plus large gamme de densités de surface a été obtenue avec une incubation de 5 à 10 minutes de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent à une large gamme de concentrations (S2 Fig).

En utilisant le western blot sur des lysats cellulaires bouillis séparés par SDS-PAGE, nous avons visualisé l'ancre du ligand en sondant l'étiquette HA N-terminale (S2 Fig). L'ajout de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent aux cellules a conduit à une augmentation substantielle du poids moléculaire d'une proportion significative d'ancre de ligand compatible avec le couplage covalent à la protéine de fusion soluble. Le sondage avec un anticorps anti-streptavidine a confirmé cela (S2 Fig).

Une évolution dans le temps a montré qu'une proportion significative de ligand générique reste à la surface cellulaire pendant plusieurs heures après la reconstitution (S2 Fig). Les dosages de stimulation des récepteurs sont généralement conduits sur cette période afin que le ligand soit capable de fournir un stimulus puissant pendant cette durée.

Mesurer le nombre de ligands génériques par cellule

Une force majeure du système de ligand générique est que la dose de ligand peut être facilement modifiée en titrant la concentration de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent soluble ajouté aux cellules. Pour nous permettre de déterminer la densité de surface de ligand requise pour l'activation, nous avons développé une méthode pour mesurer le nombre de ligands génériques par cellule. Cette méthode utilise deux dosages. Le premier, dans lequel les cellules de ligand générique CHO sont incubées avec de la biotine ATTO 647, donne une indication de la façon dont le nombre relatif de sites de ligand générique varie avec la concentration de Strep-Tactin-SpyCatcher (figure 2B).

Le deuxième test mesure le nombre maximum moyen de ligands génériques par cellule dans une population de cellules saturées de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent. Cela utilise le même test d'extinction de fluorescence de la biotine-4-fluorescéine illustré dans la figure S1. En supposant une liaison complète, la concentration de biotine-4-fluorescéine qui sature les cellules est indiquée par le point d'inflexion du graphique (figure 2C). Cette concentration saturante pour un nombre connu de cellules dans un volume défini peut ensuite être convertie en un nombre moyen de ligands génériques par cellule (voir la section Mesurer le nombre de ligands génériques par cellule). En combinant le nombre absolu de ligands génériques par cellule à saturation (figure 2C) et les niveaux relatifs de ligands sur une plage de concentrations de Strep-Tactin-SpyCatcher trivalents solubles (figure 2B), le nombre moyen de ligands génériques par cellule pour un produit soluble donné la concentration trivalente Strep-Tactin-SpyCatcher peut être estimée (Fig 2D). Un maximum de 3 millions de ligands génériques par cellule peut être atteint de manière cohérente, et la dose de ligand peut donc facilement être modifiée sur plusieurs ordres de grandeur.

Les NTR activatrices représentatives peuvent être stimulées par un ligand générique

Des NTR humains activants représentatifs de diverses familles de récepteurs ont été génétiquement modifiés pour avoir une étiquette Twin-Strep N-terminale (figure 3A).

(A) Des représentations de dessins animés de quatre NTR représentatifs avec des balises Twin-Strep et des protéines adaptatrices sont présentées. Dans le cas du TCR 1G4, la chaîne a une étiquette Twin-Strep N-terminale. La région extracellulaire de chaque récepteur contient un ou plusieurs domaines de type immunoglobuline (voir la légende de la figure 1). Réponse des cellules SIRPβI (B), Siglec-14 (C) ou NKp30 (D) étiquetées Twin-Strep au ligand générique présenté sur des cellules CHO. La réponse des récepteurs est mesurée par la sécrétion d'IL-8. (E) Réponse des cellules Jurkat NFκB eGFP 1G4 TCRα/β-Twin-Strep-tag au ligand générique présenté sur des cellules CHO. Réponse du récepteur, indiquée par l'expression de l'eGFP sous le contrôle de la NF??Le promoteur B est indiqué en pourcentage de cellules positives pour l'eGFP au-dessus du bruit de fond. Les barres d'erreur indiquent la plage (m = 2), et les données sont représentatives de trois expériences indépendantes. Au sein de chaque stimulation, un échantillon de cellules CHO a été prélevé et utilisé pour mesurer le nombre de ligands génériques par cellule comme dans (Fig 2). La densité de ligand a été calculée à partir de ces nombres en utilisant une surface cellulaire CHO estimée à 700 m 2 (voir la section Mesure du nombre de ligands génériques par cellule) [22, 23]. (F) CE50 les valeurs d'expériences individuelles de cellules THP-1 SIRPβI DAP12, THP-1 Siglec-14 DAP12, THP-1 NKp30 FcRγ ou Jurkat NFκB eGFP 1G4 TCRα/β répondant au ligand générique sont tracées. Les barres indiquent la moyenne et l'écart type (m = 3). Les données numériques récapitulatives sont fournies dans les données S1. CHO, ovaire de hamster chinois DAP12, protéine activatrice de DNAX de 12 kDa eGFP, protéine fluorescente verte améliorée IL-8, interleukine 8 NFκB, facteur nucléaire kappa-light-chain-enhancer des cellules B activées NK, tueur naturel NTR, non catalytique récepteur tyrosine-phosphorylé Siglec-14, lectine de type immunoglobuline liant l'acide sialique 14 SIRPβI, protéine régulatrice du signal βI TCR, récepteur des cellules T.

SIRPβI (CD172b) et Siglec-14 sont exprimés dans un certain nombre de leucocytes, dont les monocytes et les macrophages [37, 38]. Siglec-14 se lie à l'acide sialique présenté par de nombreuses bactéries pour induire des réponses incluant la sécrétion de cytokines [38]. Il existe des preuves que SIRPβI contribue à la migration transépithéliale des neutrophiles et à la phagocytose des macrophages, mais un ligand n'a pas encore été identifié [37]. Un ligand générique est donc très utile pour l'étude de SIRPβI. En tant que membre de la famille de cytotoxicité des cellules NK, NKp30 (CD337) est exprimé dans les cellules NK et se lie aux ligands pathogènes et cellulaires pour médier la cytotoxicité des cellules NK [39].

Les récepteurs SIRPβI, Siglec-14 et NKp30 s'associent chacun à des protéines adaptatrices qui contiennent des résidus tyrosine phosphorylables cytoplasmiques qui médient la signalisation immunitaire [37-39]. Par conséquent, pour établir des lignées cellulaires stables, les cellules THP-1 ont été cotransduites avec des lentivirus codant pour le récepteur marqué et l'adaptateur approprié (S3 Fig).

Le complexe αβ TCR est constitué de chaînes et β de TCR associées à un homodimère de TCRζ et à des hétérodimères CD3δε et CD3γε. La chaîne α du TCR 1G4 et la chaîne marquée par Twin-Strep ont été transduites dans une lignée cellulaire rapporteur du facteur nucléaire Jurkat kappa-light-chain-enhancer de cellules B activées (NFκB) dans laquelle la production d'eGFP est sous le contrôle de la NFκB promoteur (S3 Fig) [14, 15]. Toutes les chaînes α et du TCR 1G4 exprimées à la surface cellulaire sont présumées être associées à des sous-unités de signalisation TCR/CD3 endogènes.

Les quatre récepteurs marqués ont été activés par des cellules ligands génériques avec une réponse dose-dépendante claire, qui augmentait avec le nombre de ligands génériques par cellule (Fig. 3B-3E). Cette réponse était spécifique, comme le montre l'absence de sécrétion d'IL-8 ou d'expression d'eGFP induite par NFκB dans les échantillons contenant des cellules réceptrices témoins négatives (Fig. 3B-3E). Le CE50 les valeurs des réponses des récepteurs de trois expériences indépendantes sont présentées sur la figure 3F. Ainsi, le ligand générique peut se lier à et déclencher plusieurs récepteurs différents portant une étiquette Twin-Strep N-terminale.

Le TCR marqué par Twin-Strep répond au ligand générique et au ligand natif avec une sensibilité similaire

Afin de valider cette approche, nous avons comparé la réponse du TCR au ligand générique avec sa réponse au ligand natif, pMHC.

1G4 TCR et son ligand apparenté NY-ESO-1157−165 Le variant peptidique 9V (SLLMWITQV) présenté en complexe avec HLA-A*02 est une paire récepteur-ligand bien caractérisée [40–42]. La constante de dissociation de la liaison du TCR 1G4 à 9V-HLA-A*02 (K = 6–7 M) est comparable au K nous avons mesuré Twin-Strep-tag et trivalent Strep-Tactin-SpyCatcher (Fig 2A) [41, 42].

Pour comparer la réponse du TCR à un ligand générique ou natif, la lignée cellulaire rapporteur Jurkat NFκB eGFP transduite avec 1G4 TCR α et des chaînes marquées par Twin-Strep (S3 Fig) a été présentée à des cellules CHO qui expriment à la fois HLA-A*02 dans la forme d'un SCD et l'ancre de ligand générique (Fig 4A, S3 Fig). Ces cellules CHO ont été soit préincubées avec du Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent, soit chargées avec le peptide 9V. Pour permettre une comparaison directe entre le ligand générique et pMHC, les cellules Jurkat NFκB eGFP n'ont pas été transduites avec le corécepteur CD8, car il se lie au CMH mais pas au ligand générique.

(A) Un dessin illustrant le TCR 1G4 avec une étiquette Twin-Strep N-terminale à chaîne présentée à 9V-HLA-A*02 ou à un ligand générique sur des cellules CHO. (B) Le nombre moyen de 9V-HLA-A*02 par cellule en fonction de la concentration de peptides ajoutés a été mesuré à l'aide de TCR fluorescent 1G4 haute affinité soluble et de billes de quantification de fluorescence. Les nombres interpolés de 9V-HLA-A*02 sont affichés. (C) Réponse de Jurkat NF??Cellules B eGFP 1G4 TCRα/β à un ligand générique ou 9V-HLA-A*02 présenté sur des cellules CHO. La réponse du récepteur, telle qu'indiquée par l'expression de l'eGFP sous le contrôle du promoteur NFκB, est montrée normalisée par rapport à la réponse maximale du récepteur à 9V-HLA-A*02 ou à un ligand générique. Les barres d'erreur indiquent la plage (m = 2), et les données sont représentatives de trois expériences indépendantes. (DÉC50 les valeurs d'expériences individuelles de cellules Jurkat NFκB eGFP 1G4 TCRα/β répondant à 9V-HLA-A*02 ou à un ligand générique sont tracées. Les barres indiquent la moyenne et l'écart type (m = 3). Les données numériques récapitulatives sont fournies dans les données S1. AU, unités arbitraires CHO, eGFP d'ovaire de hamster chinois, protéine fluorescente verte améliorée NFκB, facteur nucléaire kappa-light-chain-enhancer des lymphocytes B activés TCR, récepteur des lymphocytes T.

Afin de comparer quantitativement la réponse du TCR au ligand générique ou au 9V-HLA-A*02, nous avons mesuré le nombre de molécules 9V-HLA-A*02 sur les cellules du ligand CHO. Pour cela, nous avons utilisé une forme soluble à affinité améliorée (c58/c61) du TCR 1G4 qui se lie à 9V-HLA-A*02 avec une affinité beaucoup plus élevée que le TCR de type sauvage (K = 71 pM) [25, 43]. Ce TCR de haute affinité 1G4 soluble a été marqué avec Alexa Fluor 647 (1G4hi TCR AF647) et utilisé en combinaison avec des billes de quantification de fluorescence pour interpoler le nombre moyen de 9V-HLA-A*02 par cellule (Fig 4B, S4 Fig). L'incubation de cellules HLA-A*02 d'ancrage de ligand CHO avec des concentrations variables de peptide 9V a donné une large plage dynamique de nombre de ligands par cellule (figure 4B). Par conséquent, nous avons pu présenter des cellules Jurkat NFκB eGFP 1G4 TCRα/β-Twin-Strep-tag avec des cellules HLA-A*02 d'ancrage de ligand CHO présentant soit 9V-HLA-A*02 soit un ligand générique à des densités similaires.

Jurkat NF??Les cellules B eGFP 1G4 TCRα/β-Twin-Strep-tag ont répondu à la fois au 9V-HLA-A*02 et au ligand générique d'une manière spécifique dépendante de la dose, visualisée à l'aide du rapporteur NFκB (Fig 4C). Le CE50 les valeurs de trois expériences indépendantes sont présentées sur la figure 4D. Il existe une différence de 2 fois dans la sensibilité moyenne entre la réponse du récepteur au 9V-HLA-A*02 par rapport au ligand générique.

Sur la base de la structure du 1G4 TCRα/β soluble lié au pMHC apparenté, nous prédisons que la présence de Twin-Strep-tag ne devrait pas interférer avec la liaison TCR-pMHC (numéro d'accession PDB : 2BNR) [41]. Nous avons utilisé une coloration tétramère pMHC classe I soluble pour le confirmer. Étant donné que la coloration tétramère des cellules Jurkat NFκB eGFP 1G4 TCRα/β en l'absence d'expression du corécepteur CD8 était très faible, nous avons utilisé des cellules qui expriment CD8. Les cellules Jurkat NFκB eGFP exprimant les TCRα/β et CD8α/β non marqués, Strep-tag II ou Twin-Strep-tagged 1G4 TCRα/β et CD8α/β ont été appariées pour l'expression de la chaîne TCRβ et CD8α (S4 Fig). Ces cellules ont montré une coloration du tétramère de pMHC apparenté (figure S4), suggérant que la présence de Strep-tag II n'interfère pas de manière significative avec la liaison de pMHC.

En résumé, nous avons démontré que le ligand générique peut provoquer une réponse du récepteur comparable au ligand physiologique, renforçant son utilité pour étudier l'activation du récepteur.

Manipulation du système de ligand générique

Notre système de ligand générique pourrait être adapté pour permettre la manipulation de propriétés de ligand autres que la densité de surface, telles que la longueur, l'affinité et la valence, comme illustré dans (Fig. 5A-5C). Par exemple, le récepteur peut être marqué avec un Strep-tag II N-terminal et présenté à Strep-Tactin-SpyCatcherΔ monovalent sur les cellules, produisant une paire récepteur-ligand avec une constante de dissociation 6 fois plus élevée que le Twin-Strep-tag -paire Strep-Tactine trivalente, (K = 43 M) (figure 5B, figure S5). La préparation de Strep-Tactin-SpyCatcherΔ monovalent et la quantification des nombres de ligands monovalents Strep-Tactin-SpyCatcherΔ par cellule sont effectuées de la même manière que pour le système à plus haute affinité (S5 Fig, S6 Fig). Siglec-14 avec Strep-tag II N-terminal et exprimé avec son adaptateur dans des cellules THP-1 était capable de répondre au Strep-Tactin-SpyCatcherΔ monovalent présenté sur des cellules CHO (Fig 5D). Le CE50 de cette réponse (valeur moyenne et écart type de 1 000 000 et 330 000 ligands génériques par cellule) à une interaction de plus faible affinité était plus élevée, d'environ 5 fois, par rapport à celle mesurée pour Siglec-14 avec Twin-Strep-tag et trivalent Strep -Tactin-SpyCatcher (moyenne CE50 valeur et écart type de 190 000 et 170 000 ligands génériques par cellule) (Fig 3F, Fig 5E). Bien que cette différence de CE50 est en corrélation avec la différence de K, les niveaux d'expression des récepteurs Strep-tag II et Twin-Strep-tag n'étaient pas appariés dans ces expériences préliminaires.

(A) La région extracellulaire du ligand générique peut être allongée par insertion de domaines espaceurs inertes. (B) Les formes mutées de Strep-Tactin/streptavidine peuvent être substituées dans l'interaction récepteur-ligand générique pour étudier comment la modification de l'affinité de liaison affecte l'activation et la signalisation du récepteur. Les variantes de Strep-Tactin sont présentées dans différentes couleurs. (C) Les tétramères Strep-Tactin-SpyCatcher avec un nombre variable de sites de liaison Strep-tag II peuvent être couplés à des cellules d'ancrage du ligand CHO pour examiner l'effet de la variation de la valence du ligand générique sur le déclenchement de la NTR. Par exemple, les récepteurs marqués par Strep-tag II peuvent être présentés à un ligand générique monovalent ou trivalent. (D) Réponse des cellules THP-1 Siglec-14–Strep-tag II DAP12 au ligand générique Strep-Tactin monovalent ou trivalent Strep-Tactin présenté sur des cellules CHO. La réponse des récepteurs est mesurée par la sécrétion d'IL-8. Les données sont représentatives de trois expériences indépendantes. Dans chaque stimulation, un échantillon de cellules CHO a été prélevé et utilisé pour mesurer le nombre de sites de liaison Strep-tag II par cellule comme dans la figure 2. La densité de ligand a été calculée à partir de ces nombres (voir la section Mesure du nombre de ligands génériques par cellule) . CE50 (E) et les valeurs de réponse maximale (F) d'expériences individuelles de cellules THP-1 Siglec-14–Strep-tag II DAP12 répondant au ligand générique Strep-Tactin monovalent ou trivalent Strep-Tactin sont tracées. Les barres indiquent la moyenne et l'écart type (m = 3). Les données numériques récapitulatives sont fournies dans les données S1. CHO, ovaire de hamster chinois DAP12, protéine activatrice de DNAX de 12 kDa IL-8, interleukine 8 NTR, récepteur non catalytique tyrosine phosphorylé Siglec-14, lectine de type immunoglobuline liant l'acide sialique 14.

En plus du Strep-Tactin monovalent, nous avons présenté les cellules THP-1 Siglec-14 Strep-tag II au Strep-Tactin-SpyCatcher trivalent sur des cellules CHO (Fig 5D). Cette augmentation de la valence de l'interaction récepteur-ligand générique de monovalent à trivalent a entraîné une CE 5 fois inférieure50 de la réponse de sécrétion d'IL-8 par les cellules THP-1 (CE moyenne50 valeurs de 200 000 contre 1 000 000 de sites de liaison Strep-tag II par cellule pour les ligands trivalents et monovalents, respectivement). Bien que cela montre qu'une valence accrue améliore l'activation du récepteur Siglec-14, d'autres expériences sont nécessaires pour déterminer dans quelle mesure cela est le résultat d'un engagement accru du récepteur ou d'une signalisation améliorée.

Les principes du système peuvent également être exploités pour étudier des caractéristiques mal comprises des RAC, telles que les exigences relatives à leur signalisation optimale. Il existe un intérêt croissant pour les CAR avec des domaines de liaison aux antigènes basés sur des nanocorps ciblant les antigènes tumoraux (examinés dans [44]) [45, 46].

Ici, nous utilisons des CAR de première génération standard avec des nanocorps LaG17 ou LaM8 pour la liaison du ligand et la région intracellulaire de la chaîne TCRζ pour la signalisation (LaG17-ζ et LaM8-ζ, Fig 6A et 6B). LaG17 et LaM8 se lient à GFP et mCherry, respectivement, avec K valeurs de 50 nM et 63 nM (à 25°C) [13]. Pour former les ligands CAR, les cellules d'ancrage du ligand CHO ont été incubées avec des concentrations variables de GFP soluble ou de mCherry fusionnées à SpyCatcher® (Fig. 6A–6D). GFP ou mCherry sont ainsi présentés sur les surfaces des cellules CHO à une large gamme de concentrations (Fig 6C et 6D) pour l'engagement par le CAR approprié.

(A-B) Les CAR anti-GFP LaG17 et anti-mCherry LaM8 sont exprimés dans les cellules Jurkat. Les ligands CAR comprennent l'ancre de ligand exprimée en surface cellulaire avec SpyTag N-terminal et GFP-SpyCatcher® soluble ou mCherry-SpyCatcher® couplés de manière covalente à l'ancre. Pour plus de simplicité, les CAR sont représentés liés à un seul ligand. (C-D) Quantité de ligand CAR par cellule CHO en fonction de la concentration de GFP-SpyCatcherΔ (C) ou mCherry-SpyCatcherΔ (D) ajoutée aux cellules. Les valeurs médianes d'intensité de fluorescence extraites des analyses de cytométrie en flux des cellules sont présentées. (E-F) Réponse des cellules Jurkat LaG17-ζ et Jurkat LaM8-ζ à GFP-SpyCatcherΔ ou mCherry-SpyCatcherΔ présentées sur des cellules CHO. L'expression à la surface des cellules Jurkat CD69 est tracée en fonction des niveaux relatifs du ligand CAR spécifique sur les cellules CHO. These are the GFP or mCherry median fluorescence intensity values interpolated from the data shown in Fig 6C and 6D. Data are representative of two independent experiments. (G) To extend this system to study the requirements for optimal costimulatory and inhibitory receptor signalling, cells expressing the LaG17-ζ CAR and a fusion protein consisting of LaM8 nanobody followed by the transmembrane and intracellular regions of a costimulatory or inhibitory receptor can be presented to CHO ligand anchor cells presenting both GFP-SpyCatcherΔ and mCherry-SpyCatcherΔ at titratable levels. (H) CHO ligand anchor cells were first incubated with a single below-saturation concentration of GFP-SpyCatcherΔ and then titrating concentrations of mCherry-SpyCatcherΔ. Median fluorescence intensity values extracted from flow cytometry analyses of cells are shown. Summary numerical data are provided in S1 Data. CAR, chimeric antigen receptor CHO, Chinese hamster ovary GFP, green fluorescent protein IgG4, immunoglobulin G4 mCherry, monomeric Cherry.

Jurkat cells transduced to stably express either LaG17- ζ or LaM8-ζ were activated in a clear dose-dependent manner by CHO cells presenting GFP or mCherry, respectively (Fig 6E and 6F). This Jurkat cell response, indicated by up-regulation of CD69 surface expression, was specific. CD69 up-regulation in Jurkat LaG17-ζ cells was not seen in response to CHO mCherry ligand cells nor in Jurkat LaM8-ζ cells in response to CHO GFP ligand cells.

The efficiency of coupling and the high number of SpyTag ligand anchors suggested that the system could be extended to couple with multiple SpyCatcher fusion proteins to create cells presenting multiple ligands (Fig 6G). Indeed, we show by flow cytometry that CHO ligand anchor cells preincubated to present one level of GFP-SpyCatcherΔ can be subsequently incubated with varying concentrations of mCherry-SpyCatcherΔ to titrate the surface-presented levels of this second ligand (Fig 6H). These cells could be used, for example, in combination with cells presenting both LaG17-ζ and a receptor comprising the LaM8 nanobody fused to transmembrane and cytoplasmic regions of costimulatory or inhibitory receptors. This would facilitate analysis of signal integration between multiple receptors, which remains poorly understood.


Interactions médicamenteuses

Cytochrome P450-Linked Drug Metabolizing Enzyme System

No drug interactions of clinical importance have been identified. Finasteride does not appear to affect the cytochrome P450-linked drug metabolizing enzyme system. Compounds that have been tested in man have included antipyrine, digoxin, propranolol, theophylline, and warfarin and no clinically meaningful interactions were found.

Other Concomitant Therapy

Although specific interaction studies were not performed, Proscar was concomitantly used in clinical studies with acetaminophen, acetylsalicylic acid, &alpha-blockers, angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitors, analgesics, anti-convulsants, beta-adrenergic blocking agents, diuretics, calcium channel blockers, cardiac nitrates, HMG-CoA reductase inhibitors, nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), benzodiazepines, H 2 antagonists and quinolone anti-infectives without evidence of clinically significant adverse interactions.


How to use unit in a sentence

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Résumé

The affinity system based on the artificial peptide ligand Strep-tag® II and engineered tetrameric streptavidin, known as Strep-Tactin®, offers attractive applications for the study of recombinant proteins, from detection and purification to functional immobilization. To further improve binding of the Strep-tag II to streptavidin we have subjected two protruding loops that shape its ligand pocket for the peptide – instead of D-biotin recognized by the natural protein – to iterative random mutagenesis. Sequence analyses of hits from functional screening assays revealed several unexpected structural motifs, such as a disulfide bridge at the base of one loop, replacement of the crucial residue Trp120 by Gly and a two-residue deletion in the second loop. The mutant m1-9 (dubbed Strep-Tactin XT) showed strongly enhanced affinity towards the Strep-tag II, which was further boosted in case of the bivalent Twin-Strep-tag®. Four representative streptavidin mutants were crystallized in complex with the Strep-tag II peptide and their X-ray structures were solved at high resolutions. In addition, the crystal structure of the complex between Strep-Tactin XT and the Twin-Strep-tag was elucidated, indicating a bivalent mode of binding and explaining the experimentally observed avidity effect. Our study illustrates the structural plasticity of streptavidin as a scaffold for ligand binding and reveals interaction modes that would have been difficult to predict. As result, Strep-Tactin XT offers a convenient reagent for the kinetically stable immobilization of recombinant proteins fused with the Twin-Strep-tag. The possibility of reversibly dissociating such complexes simply with D-biotin as a competing ligand enables functional studies in protein science as well as cell biology.


What does units/mg mean for Streptavidin - Biology

A z-score describes the position of a raw score in terms of its distance from the mean, when measured in standard deviation units. The z-score is positive if the value lies above the mean, and negative if it lies below the mean.

It is also known as a standard score, because it allows comparison of scores on different kinds of variables by standardizing the distribution. A standard normal distribution (SND) is a normally shaped distribution with a mean of 0 and a standard deviation (SD) of 1 (see Fig. 1).

Figure 1. A standard normal distribution (SND).

Why are z-scores important?
Why are z-scores important?

It is useful to standardized the values (raw scores) of a normal distribution by converting them into z-scores because:

(a) it allows researchers to calculate the probability of a score occurring within a standard normal distribution

(b) and enables us to compare two scores that are from different samples (which may have different means and standard deviations).

How do you calculate the z-score?
How do you calculate the z-score?

The formula for calculating a z-score is is z = (x-μ)/σ, where x is the raw score, μ is the population mean, and σ is the population standard deviation.

As the formula shows, the z-score is simply the raw score minus the population mean, divided by the population standard deviation.

Figure 2. Z-score formula in a population.

When the population mean and the population standard deviation are unknown, the standard score may be calculated using the sample mean (x̄) and sample standard deviation (s) as estimates of the population values.

How do you interpret a z-score?
How do you interpret a z-score?

The value of the z-score tells you how many standard deviations you are away from the mean. If a z-score is equal to 0, it is on the mean.

A positive z-score indicates the raw score is higher than the mean average. For example, if a z-score is equal to +1, it is 1 standard deviation above the mean.

A negative z-score reveals the raw score is below the mean average. For example, if a z-score is equal to -2, it is 2 standard deviations below the mean.

Another way to interpret z-scores is by creating a standard normal distribution (also known as the z-score distribution or probability distribution).

Fig 3 illustrates the important features of any standard normal distribution (SND).

Figure 3. A standard normal distribution (SND) and normal distribution.

  1. The SND (i.e. z-distribution) is always the same shape as the raw score distribution. For example, if the distribution of raw scores if normally distributed, so is the distribution of z-scores.
  2. The mean of any SND always = 0.
  3. The standard deviation of any SND always = 1. Therefore, one standard deviation of the raw score (whatever raw value this is) converts into 1 z-score unit.

The SND allows researchers to calculate the probability of randomly obtaining a score from the distribution (i.e. sample). For example, there is a 68% probability of randomly selecting a score between -1 and +1 standard deviations from the mean (see Fig. 4).

Figure 4. Proportion of a standard normal distribution (SND) in percentages.

The probability of randomly selecting a score between -1.96 and +1.96 standard deviations from the mean is 95% (see Fig. 4). If there is less than a 5% chance of a raw score being selected randomly, then this is a statistically significant result.

How to calculate a raw score when a z-score is known
How to calculate a raw score when a z-score is known

Sometimes we know a z-score and want to find the corresponding raw score. The formula for calculating a z-score in a sample into a raw score is given below:

As the formula shows, the z-score and standard deviation are multiplied together, and this figure is added to the mean.

Check your answer makes sense: If we have a negative z-score the corresponding raw score should be less than the mean, and a positive z-score must correspond to a raw score higher than the mean.

How to calculate a z-score using excel
How to calculate a z-score using excel

To calculate the z-score of a specific value, x, first you must calculate the mean of the sample by using the AVERAGE formula.

For example, if the range of scores in your sample begin at cell A1 and end at cell A20, the formula =AVERAGE(A1:A20) returns the average of those numbers.

Next, you mush calculate the standard deviation of the sample by using the STDEV.S formula. For example, if the range of scores in your sample begin at cell A1 and end at cell A20, the formula = STDEV.S (A1:A20) returns the standard deviation of those numbers.

Now to calculate the z-score type the following formula in an empty cell: = (x – mean) / [standard deviation].

To make things easier, instead of writing the mean and SD values in the formula you could use the cell values corresponding to these values. For example, = (A12 – B1) / [C1].

Then, to calculate the probability for a SMALLER z-score, which is the probability of observing a value less than x (the area under the curve to the LEFT of x), type the following into a blank cell: = NORMSDIST( and input the z-score you calculated).

To find the probability of LARGER z-score, which is the probability of observing a value greater than x (the area under the curve to the RIGHT of x), type: =1 - NORMSDIST (and input the z-score you calculated).


What does units/mg mean for Streptavidin - Biology

Little Pro on 2016-06-17 Views:

In toxicology and eco-toxicology, dose descriptor is the term used to identify the relationship between a specific effect of a chemical substance and the dose at which it takes place. The dose descriptors will be used later for deriving the no-effect threshold levels for human health (i.e, DNEL or reference dose RfD) and the environment (PNEC). Dose descriptors are determined in the toxicological studies on the hazards of the substance and are usually expressed as LC50, LD50, NOAEL, NOAEC, T25, BMD, EC50, NOEC, DT50, etc. They are used for GHS hazard classification and risk assessment. In this article, we will summarize the definition of common toxicology dose descriptors, how they are obtained and what the units are.

LD50 and LC50

LD50 (Lethal Dose 50%) is a statistically derived dose at which 50% of the animals will be expected to die. For inhalation toxicity, air concentrations are used for exposure values. Ainsi, le LC50 (Lethal Concentration 50%) est utilisé.

LD50 and LC50 are typically obtained from acute toxicity studies.The units of LD50 and LC50 are listed as follows:

  • LD50: mg/kg bw. mg/kg bw/d stands for mg of substance per kg of body weight administered per day.
  • LC50:mg/L. mg/L is the estimated air concentration of a substance administered via inhalation route. Parfois, ppm est utilisé.

Lower LD50/LC50 value indicates higher acute toxicity.

NOAEL

No Observed Adverse Effect Level (NOAEL) is the highest exposure level at which there are no biologically significant increases in the frequency or severity of adverse effect between the exposed population and its appropriate control some effects may be produced at this level, but they are not considered adverse effects.

NOAEL are typically obtained from repeated dose toxicity studies (28d repeated dose toxicity study, 90d repeated dose toxicity study or chronic toxicity) and reproductive toxicity studies. NOAELs are very important. They are used to derive threshold safety exposure dose to humans such as derived no-effect level (DNEL), occupational exposure limit (OEL) and acceptable daily intake (ADI).

The units of NOAEL are mg/kg bw/day ou ppm for dermal and oral route. For inthalation route, NOAEC is used instead. The unit can be mg/L/6h/day.

Higher NOAEL or NOAEC indicates lower systemic toxicity or lower chronic toxicity.

LOAEL

Lowest Observed Adverse Effect Level (LOAEL) is the lowest exposure level at which there are biologically significant increases in frequency or severity of adverse effects between the exposed population and its appropriate control group.

Sometimes, only LOAEL can be obtained from repeated dose toxicity studies (28d repeated dose toxicity study, 90d repeated dose toxicity study or chronic toxicity) and reproductive toxicity studies due to study design. If NOAELs cannot be identified, LOAEL are also used to derive threshold safety exposure dose to humans such as derived no effect level (DNEL). However, higher assessment factors need to be applied.

The picture below shows you the relationship between LD50, LOAEL, NOAEL and DNEL on a typical dose-response curve.

T25 and BMD10

It is generally recognized that some chemicals (non-threshold carcinogens) will cause carcinogenic risks even at the smallest exposure concentration. For many carcinogenicity studies, the conventional NOAEL cannot be identified for risk assesment. Thus T25 and BMD10 are used.

  • T25: the chronic dose rate that will give 25% of the animals&rsquo tumors at a specific tissue after correction for spontaneous incidence, within the life time of that species.
  • BMD10: derived bench mark dose assumed to give 10% of the animals&rsquo tumors at a specific tissue after correction for spontaneous incidence, within the life time of that species.

The units of T25 and BMD10 are mg/kg bw/day ou ppm. They can be used to calculate derived minimal effect level (DMEL) - a level of exposure below which the risk levels of carcinogen become tolerable.

In ecotoxicity, EC50 (median effective concentration) is the concentration of test substance which results in a 50 percent reduction in either algae growth (EbC50) or algae growth rate (ErC50) or Daphina immobilization.They are often obtained from acute aquatic oxicity studies.

The units of EC50 are mg/L. EC50 values are often used for acute enviromental hazard classification and calculation of predicted non-effect concentration (PNEC).

No observed effect concentration (NOEC) is the concentration in an environmental compartment (water, soil, etc) which below an unacceptable effect is unlikely to be observed. It is typically obtained from chronic aquatic toxicity studies and terrestrial toxicity studies.

The units of NOEC are mg/L. NOEC values are often used for chronic enviromental hazard classification and calculation of predicted non-effect concentration (PNEC).

Half-life (DT50) is defined as the time it takes for an amount of a compound to be reduced by half through degradation in an environmental compartment (water, soil, air, etc). It is used to measure the persistence of a substance.

The unit is journée. DT50 is often used in environmental exposure modelling to predict the concentration of a substance in an environmental compartment over a long time of period.

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Commentaires:

  1. Kajirg

    Pas toujours, parfois même plus tôt =)

  2. Sadaka

    Ce n'est pas significatif.

  3. Westbroc

    Félicitations, quel excellent message.

  4. Kianni

    Cela aura une excellente phrase

  5. Jawad

    Le vent soufflera tous les maux

  6. Dutaur

    Et comment agir dans ce cas?



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